当多重PCR遇上复杂样本:不要犹豫,做直扩!-技术前沿-资讯-生物在线

当多重PCR遇上复杂样本:不要犹豫,做直扩!

作者:苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 2026-01-15T00:00 (访问量:938)

直扩PCR(Direct PCR)是一种无需核酸提取步骤、可直接对原始生物样本(如血痕、血卡、唾液斑及现场混合检材)进行扩增的技术。该技术通过简化操作、提升效率并降低成本,正推动法医检测进入免提取的精准时代,显著缩短鉴定时间,同时减少样本损耗与污染风险。2024年,美国国家司法研究所的报告明确将直接PCR视为提升现场“痕量DNA”证据分析速度、简化流程的关键技术。

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图示.直扩PCR流程[1]

该技术的核心在于采用了经深度优化的高耐受性DNA聚合酶和专用缓冲体系,能够有效克服血红素、环境降解产物及各类常见PCR抑制剂的干扰,从而在复杂的现场生物检材中仍能保证扩增的稳定性与可靠性。

 

近岸蛋白HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)(Cat. No.: E285-03) ,一款专为多重PCR 和高要求扩增场景设计的无甘油热启动Taq酶。

产品应用

基因组分型、司法鉴定、高通量遗传鉴定分析、多重病原体检测等。

产品特点

强耐受性

对血红素、腐殖酸等常见PCR抑制剂表现强耐受性(抗腐殖酸可达70 ng/T,抗血红素可达12 μM),确保在复杂样本中依然可以稳定扩增。

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强稳定性-37℃加速

37℃放置7天能稳定检出低至4 pg的cDNA模板;

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37℃放置9天,酶量低至0.625 U时,可稳定检出含有25%猪血背景的4 ng cDNA模板;

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37℃放置9天,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

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强稳定性-反复冻融

经过25次冻融,试剂仍能稳定检测到低至400 fg的微量cDNA模板;

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经过25次冻融后,低至0.625 U的酶量可稳定检出含有25%猪血背景的4 ng cDNA模板;

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经过25次冻融后,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

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强稳定性-模拟运输

试剂模拟运输96 h后,37℃放置7天能稳定检出到低至4 pg的cDNA模板;

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试剂模拟运输96h后,37℃放置7天,酶量低至0.625U能稳定检出含有25%猪血背景的4ng cDNA模板;

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试剂模拟运输96h后,37℃放置7天,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

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更快的热启动

预变性时间可缩短至95℃ 30s,与2min效果无显著差异,进一步缩短热启动时间。

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客户实测

本次实验在优化条件下,比较了两种扩增酶对磁珠提取的血液DNA样本进行30重STR分型的检测性能。毛细管电泳(CE)结果显示,两者在200–500 bp 范围内均呈现出清晰、分离度良好的峰,无明显杂峰或引物二聚体,表明扩增效率相当且特异性高。

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同样,在Chelex粗处理DNA的扩增性能表明两种扩增酶也表现出较高的一致性。

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产品信息

目录号
E285-03
产品名称
HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)
规格
10 U/μl
20 U/μl
1 KU
5 KU
10 KU
10 KU
20 KU

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产品分类
产品货号
产品名称
简介
试剂盒
RNA靶标
E495
NovoScript® FAST Probe One Step qRT-PCR Kit (UDG)
探针法qRT-PCR快速检测试剂盒,兼容快速程序,高耐受性
DNA靶标
E501
NovoStart® Universal Probe qPCR SuperMix(UDG)
通用性好,无需ROX校准;支持引物探针提前预混
单酶
双封闭抗体
Z088
NovoStart® Double-Block Taq Antibody
双位点封闭、高特异性的Taq DNA 酶抗体
单封闭抗体
Z087
Taq antibody
高特异性热稳定的Taq 酶抗体,具有极高的纯度和批次稳定性
热启动酶
E208
HotStart UltraTaq DNA Polymerase
双封闭抗体法修饰的Taq DNA 聚合酶,可支持全预混体系搭建
E097
HotStart Taq DNA Polymerase (B)
特异性好且灵敏度高的的热启动Taq酶
逆转录酶
E226
NovoScript® Ⅲ Reverse Transcriptase
三代逆转录酶,高灵敏度,50℃逆转录
热敏UDG
E063
Heat-labile UDG
55°C 10min 使酶发生不可逆失活,兼容常见的 PCR 反应体系

 

参考文献

[1] U.S. Deppartment of Justice (NIJ). Improving Analysis of “ Trace DNA” Evidence.

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